微生物致病菌檢測儀-大腸桿菌O157檢測試劑盒操作說明書
大腸桿菌O157檢測試劑盒是基于公司科研團隊諸多創(chuàng)新性成果，針對快速檢測需求，實現(xiàn)在恒定溫度條件下的快速檢測，通過配套機器微生物致病菌檢測儀快速判讀結(jié)果。
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【預(yù)期用途】
用于大腸桿菌O157快速檢測和篩查。
【產(chǎn)品特點】
1. 反應(yīng)速度快，僅需 60 min。
2. 操作簡單，快速判讀。
3. 靈敏度高，本試劑盒檢測限為10CFU/mL。
4. 特異性高，*的多重體系降低假陽性的出現(xiàn)。
【試劑組成】
序號 名稱 規(guī)格 數(shù)量/支
1 試劑預(yù)混液（深色遮光管） 750μL 1
2 生物酶（黃蓋管） 100μL 1
3 封閉劑（透明蓋管） 300μL 1
4 陽性對照（紅蓋管） 100 μL 1
5 快速釋放劑（10毫升保存管） 3ml 1
【實驗需要的器材】
微生物致病菌檢測儀、0.45μm濾膜、擦拭拭子、渦旋振蕩器、離心機、2-20μL移液器、20-200μl 移液器、1.5ml離心管、96孔板、200ul 反應(yīng)管。
【實驗前準備】
1、將微生物致病菌檢測儀通電并開機；將渦旋振蕩器、離心機通電等待使用；
2、將微生物快速釋放劑、試劑預(yù)混液、生物酶、封閉劑、陽性對照從冰箱取出恢復(fù)至室溫。試劑預(yù)混液自然解凍后渦旋混勻，瞬時離心待用。
3、取出1.5ml離心管若干只，200ul離心管、96孔板冰盒，0.45μm濾膜若干。
【樣品前處理】
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭（每次取試劑前及時更換新的吸頭），以避免污染干擾實驗結(jié)果！！！
1、采樣
水樣本每次采樣量為250ml；固體樣本使用拭子在樣本表面及可疑感染處進行擦拭，擦拭前拭子可用純水進行蘸濕處理。
2、水樣本過濾
將上述樣本用孔徑為0.45μm的濾膜進行過濾，將水樣中的微生物截留在濾膜上。
3、微生物釋放
取下濾膜，將濾膜加入到1.5ml離心管中，離心管中加入150-200μL快速釋放劑，渦旋震蕩混勻，100℃條件下熱浴5分鐘；固體樣本擦拭完成后將拭子頭投入1.5ml離心管中，離心管中加入150-200μl快速釋放劑，渦旋震蕩混勻，100℃條件下熱浴5分鐘；熱浴完成后離心管內(nèi)液體即為待檢測樣本。注：煮沸5分鐘時，離心管應(yīng)封閉完整，防止崩開。
【實驗步驟】
1、取 n 個反應(yīng)管（n=樣本數(shù)+陽性對照1+陰性對照1），單個反應(yīng)體系配制如下：
試劑 體系配制
試劑預(yù)混液（深色遮光管） 44×（n+1）μL
生物酶 （黃蓋管） 2.5×（n+1）μL
2、用移液器在一個新的 1.5 mL 離心管中加入上述試劑，渦旋混勻后瞬時離心。在每個反應(yīng)管中加入46μl混勻后的試劑，加入約10μl封閉劑（透明蓋管）進入反應(yīng)管中。
3、在上述n個反應(yīng)管中，用移液器在一個反應(yīng)管中加入陰性對照（純水即可）4μl，更換吸頭后在下一反應(yīng)管加入陽性對照（紅蓋管）4μl，再次更換吸頭后在下一反應(yīng)管中加入待檢樣本4μl，每次加樣均需更換吸頭。每管所得反應(yīng)總體積為50μl，加樣時吸頭需穿過封閉劑將模板加至反應(yīng)管底部。蓋緊管蓋，瞬時離心。（吸取及加樣時注意不要產(chǎn)生明顯氣泡）；
4、將準備好的反應(yīng)管，放置到檢測設(shè)備中，按照檢測程序63℃檢測60min。
5、將檢測管放入儀器后，點擊調(diào)零，點擊檢測，開始檢測。反應(yīng)結(jié)束后，機器自動判讀，給出陽性或陰性結(jié)果，同時可點擊頁面上“圖譜"可觀察各孔光強變化曲線，對給出的結(jié)果進行驗證。實驗結(jié)果在陽性對照顯示“陽"，陰性對照顯示“陰"的情況下為有效實驗。顯示“陽"即該孔位樣本含有該病菌，顯示為“陰"即該孔位樣本不含該病菌，并同時給出相應(yīng)定量。若陰、陽性對照反應(yīng)管結(jié)果與上述情況不符，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品公司聯(lián)系。
【注意事項及安全提示】
1. 使用本試劑盒前請仔細閱讀說明書。不同批號的產(chǎn)品請勿混合使用，避免反復(fù)凍融，請在有效期內(nèi)使用試劑盒，由于操作不當引起的誤判，以及有此誤判引發(fā)的其他事項，本公司概不負責。
2. 檢測空間應(yīng)嚴格分區(qū)操作，在空間條件允許情況下，試劑配置區(qū)用于配置反應(yīng)所需要的所有試劑；樣品前處理區(qū)用于待測樣品的處理及加樣；擴增觀察區(qū)用于反應(yīng)進行和結(jié)果判讀。各區(qū)內(nèi)空間獨立，試驗用品專用，避免交叉污染。另外，樣品處理區(qū)建議配備超凈工作臺，所有步驟嚴格按照說明書的要求進行。
3.加樣時應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡，反應(yīng)前注意觀察反應(yīng)管是否蓋緊，以免泄露，造成污染。實驗中所使用的離心管、吸頭應(yīng)保證無菌、無污染。試劑盒內(nèi)陽性對照應(yīng)視為具有污染性物質(zhì)，應(yīng)避免污染其它樣本和反應(yīng)試劑，導(dǎo)致錯誤檢測結(jié)果。
4. 檢測過程中建議穿潔凈工作服，帶一次性手套，使用的槍頭需提前滅菌。
5. 陽性對照可能會作為污染源，污染其他試劑和待檢樣品，導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性結(jié)果，在加樣過程中建議最后加入陽性對照。
6. 上機前注意檢查反應(yīng)管是否蓋緊，以免泄漏污染儀器。在反應(yīng)結(jié)束后切忌開蓋，以防氣溶膠污染。
7. 試劑盒使用完畢廢棄時按照廢棄物相關(guān)規(guī)定處理，由使用者自行負責處理。
8. 工作臺及各物品定期用 1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈處理。
【貯存方法及有效期】
1、本品應(yīng)貯存在溫度-20℃范圍內(nèi)
2、有效期6個月
3、生產(chǎn)日期見盒裝標簽
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